质粒提取_质粒提取试剂盒中P1、P2和P3的成分
【质粒提取】大提取质粒的基本原理与小提取质粒相同。
两者都是通过一定的方法(如碱裂解)释放大量在细菌中扩增的质粒,【质粒提取】然后通过脱蛋白、去除RNA等一系列步骤纯化DNA,最后提取DNA。
差异
1、大提取用于提取大量菌液,可为100,【质粒提取】小提取使用少量菌液,通常为1.5-5ml
2、一般是溶菌酶、异丙醇(回收沉淀核酸)、含有一定量PEG的氯化物(回收质粒DNA)、醋酸铵等。
比小盒子里的还多。
它们的功能和用途有利于细菌裂解和质粒纯化,【质粒提取】因此大提取的产物比小提取的多得多,纯度也很高。
3、小提取物一般用于质粒鉴定和纯度要求低的实验,【质粒提取】大提取物用于质粒的大量提取和转染等纯度要求高的实验。
1、提取过程应尽可能低。
2、在提取质粒DNA的过程中,【质粒提取】去除蛋白质是非常重要的。
苯酚/氯仿比单独使用苯酚或氯仿要好。为了尽可能干净地去除蛋白质,需要多次提取。
3、冰乙醇通常用于沉淀DNA,【质粒提取】在低温下放置较长时间即可完全沉淀。异丙醇(通常用等体积)也可以用来沉淀DNA,沉淀比较彻底快速,但是盐往往是沉淀出来的,所以大部分还是用乙醇。
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