dna提取试剂盒_dna提取试剂盒各缓冲液成分
【dna提取试剂盒】低操作方法操作流程见图
1、整个操作大约需要1小时,包括匀浆、细胞裂解【dna提取试剂盒】、蛋白质去除、DNA纯化等步骤。
详情如下
1、匀浆和细胞溶解。
当使用不同的实验材料时,需要不同的均化步骤,【dna提取试剂盒】如下所述[从动物组织中提取基因组DNA◆用砂浆均质时(1)取动物组织或人体组织1~
10、mg,移入冰浴预冷的研钵中,迅速大力研制成匀浆。
注)请将下列组织加入液氮,研磨成粉末。A.富含脱氧核糖核酸酶的组织,【dna提取试剂盒】如胰腺、脾脏、胸腺和淋巴。
B.皮肤、肌腱等富含胶原蛋白的组织。
C.富含角蛋白的组织或硬组织(如骨骼)。②加入650μl a和0.9μl A1,【dna提取试剂盒】轻轻研磨30秒。注)使用上述①-注)中提到的实验材料时,请加入A和RNase A1,将砂浆放入65℃水浴中研磨1分钟。
③收集
65、μl磨碎的组织匀浆【dna提取试剂盒】,并转移至试管。
如果匀浆体积小于
65、μl,请加A至
65、μl,并在65℃保温5分钟。
◆用研磨棒均质时(1)取动物组织或人体组织1~
10、mg,移入冰浴预冷的试管中,【dna提取试剂盒】用研磨棒快速研磨成糊状。
②加入
35、μl的a和0.9μl的RNase A1,【dna提取试剂盒】然后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③加入350μl a,将研磨棒上的匀浆冲入试管,摇匀,充分混合,保持温度在65℃5分钟。【dna提取试剂盒】[从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA(1)按下表称取适量新鲜植物材料(如选用冻干植物材料,量减半),切成小块,放入研钵中,加入液氮,待样品完全冷冻后,迅速大力研磨成粉。
研磨过程中应间歇加入液氮,以防止材料熔化。【dna提取试剂盒】植物材料的类型使用的植物材料数量*植物的花和叶10~100毫克植物茎60~240毫克植物根80~240毫克种植种子80~240毫克*如果选择植物的根、种子等样本,由于其基因组DNA含量很低,需要使用的参数比表中所示的多。
此时,请在两个试管中进行步骤1-6中的实验操作,【dna提取试剂盒】然后将每个试管的溶液添加到相同的自旋中进行步骤7中的过滤,以便每个试管的基因组DNA可以与相同的自旋结合。
如果从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集
2、
10、~
1、107个培养的植物细胞,加入
15、μl水使细胞充分悬浮,移入研钵中,加入液氮,【dna提取试剂盒】快速强力研磨成粉末。
注意)样品研磨要充分,否则会严重影响基因组DNA的产量。②将研钵移至65℃水浴中,当样品粉末开始熔化时,向研钵中加入
70、μl的a和1.2μl的RNase A1【dna提取试剂盒】,剧烈研磨30秒。
③收集
65、μl磨碎的组织匀浆,并转移至试管。
如果匀浆的体积小于650微升,请在650微升中加入甲..65℃保温15分钟。【dna提取试剂盒】注)处理富含纤维的根/茎或富含淀粉和蛋白质的种子等植物材料时,水浴时间可延长至60分钟。
[从全血中提取基因组DNA①取全血(含抗凝剂)
1、~【dna提取试剂盒】
25、μL,加入试管。
②加入500μl a..③加入1μl RNase A1【dna提取试剂盒】,剧烈摇动15秒,然后冰浴5分钟。注)人和动物抗凝全血一次处理量≤250μL
家禽和两栖动物抗凝全血的处理量一次≤
1、μl。
[从培养细胞中提取基因组DNA◆使用悬浮培养的动物细胞时①用试管收集
1、
10、~【dna提取试剂盒】
1、【dna提取试剂盒】
5、107的细胞悬液,以5000转/分钟离心5分钟,弃去上清液(细胞培养液)。
②加入
15、μl无菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
③加入500μl a和0.8μl RNase A1,剧烈摇动15秒【dna提取试剂盒】,然后室温静置1分钟。
◆使用贴壁细胞时①弃去培养液,向培养皿中加入650μl a,室温静置1分钟。注)当96孔板的每个孔中不能容纳
65、μl溶液时,请多次处理细胞。
②用移液管吹掉单层培养细胞,将
65、μl细胞悬液转移至试管。
③加入0.8μl RNase A1,摇匀
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