【质粒载体】通过使用DNA连接酶可以将靶基因(已经切割)连接到质粒载体上。【质粒载体】通过使用限制性内切酶获得靶基因。这种酶具有特异性...【质粒载体】它可以识别特定的回文序列用于切割。

3)想要得到一个基因，有很多方法。【质粒载体】一个猎枪射击。也就是说，每个样品都添加一种限制性酶，然后进行筛选。

第二人工合成。把核苷酸剪接成mRNA，反向转录相应的基因外显子，然后手工添加内含子就够了，【质粒载体】但这种方法必须知道相应的基因序列。第三反转录。

这个和前一个的区别是——mRNA是提取出来的而不是合成的，后面的步骤是一样的。两三种方法都有一个局限性——它们只能用于真核生物的DNA提取。4)至于细胞因子基因...你应该从大肠杆菌中获得质粒，将其与目标基因连接起来，然后放回原处。

这些问题在中国地图出版社出版的高中生物教材选修3号中有详细介绍，大家可以看看。【质粒载体】质粒可以通过细菌之间的接合从一个细菌转移到另一个细菌，可以独立复制或整合到细菌染色体DNA中，并随着染色体DNA的复制而复制。

用作克隆载体的理想质粒一般具有以下特征①有一个松弛的复制子(如)【质粒载体】，这是质粒自我增殖必不可少的基本条件，可以帮助每个细胞维持一定数量的质粒拷贝。②复制子外有几个单一的限制性位点(或多个克隆位点)，使目的DNA片段可以插入。

③理想的质粒载体应具有两个抗生素抗性标记，【质粒载体】如氨苄青霉素抗性基因(Ampr)和四环素抗性基因(Tetr)，以便直接从平板上筛选阳性重组体。④分子量相对较小，拷贝数较高。

另外质粒的缺点是容量小，只能接受15kb以下的外源DNA。如果插入片段过大，【质粒载体】重组体的扩增速度会变慢，甚至会使插入片段失活。

主要是克隆目的基因，建立DNA文库和其上带有复制子的cDNA文库。

有合适的酶消化位点，【质粒载体】不重复，【质粒载体】常用有适合在基因工程细菌中复制的启动子