异丙醇的作用_异丙醇的作用是什么它的用途是什么
【异丙醇的作用】有理由说是BR标准的,也就是生化试剂等级。【异丙醇的作用】有的人用的是中医的分析纯异丙醇,不过要看你的要求。
有人说不能用分析纯。如果你在做科研,【异丙醇的作用】可以问问你的导师或者你身边的其他同学。
异丙醇还有很多其他常见的规格,比分析纯度要好。进口品牌,Sigma等。
一般用于液相色谱,大致相当于GR标准试剂。但是,【异丙醇的作用】不知道这种水平的试剂有没有被用来提取RNA。
氯仿RNA从DNA和蛋白质中分离,从混合溶液色谱分离到水相。水相RNA可以用异丙醇沉淀浓缩。
所有残留的蛋白质和无机盐可以通过用异丙醇二次沉淀,【异丙醇的作用】然后用乙醇洗涤沉淀来除去。如果RNA样品中含有无机盐,可能会抑制后续实验操作中的一些酶促反应。
异丙醇可以用无水乙醇代替。
提取步骤【异丙醇的作用】
1、取100微升-200微升新鲜或冷冻样品的肌肉组织或0.05微克95%ALC保存的样品组织。
2、尽可能多地切割组织,【异丙醇的作用】并将其放入1.5毫升离心管中。
3、加入450微升裂解缓冲液(10毫米Tris-HCl pH8.0
100毫米乙二胺四乙酸,pH8.0)在每管中加入50-100微升(70-
80、(1-2%)的10%十二烷基硫酸钠,【异丙醇的作用】然后加入2.5-5微升(3微升)蛋白酶K(20毫克/毫升)。
最终浓度为100微克/毫升。在55℃下充分混合3小时至过夜(在此期间将试管倒置数次)。
5、向样品中加入150微升氯化钠(盐析),室温下离心20分钟,除去沉淀物,然后加入上清液向溶液中加入等体积(500微升)预冷的异丙醇(DNA沉淀),然后混合均匀,在20℃处理30分钟,离心10分钟,除去上清液。
加入70%ALC沉淀,洗涤,离心除去ALC,【异丙醇的作用】在室温下挥发ALC 5-10分钟,加入500微升碲,加入10微升(最终浓度4毫克/微升),即2.5微升。37℃30分钟或65℃15分钟。
6、加入等体积的酸液(提取脱氧核糖核酸中的蛋白质),慢慢反转离心管10分钟,然后离心13000小时10分钟.用移液管(大吸头)小心地将上相取出到另一个干净的离心管中,不要接触两相之间的白色蛋白质层(根据需要重复操作几次)。
7、加入等体积的苯酚∶氯仿(1∶1),轻轻摇动,慢慢反转,在13000-离心机中混合均匀10分钟5-10分钟后,将上清液放入干净的离心管中。
8、加入等体积的氯仿(氯仿∶异戊醇(防止氯仿挥发)=24∶1)【异丙醇的作用】,轻轻摇动,慢慢反转,混合均匀10分钟,13000-离心5-10分钟。
向上清液中加入1/10体积的2M氯化钠和等体积的无水乙醇(或等体积的异丙醇),储存在-20℃(沉淀DNA),沉淀DNA 10分钟,离心5分钟,除去上清液,加入100%的ALC,离心,小心倒出ALC(以免DNA沉淀丢失),用70%的ALC再次洗涤,然后除去ALC。45℃烘干15-30分钟,沿管壁用双蒸水冲洗(te量视DNA沉淀量而定,范围80-250ul),溶解12-24小时,于-20℃保存备用。注意事项
1、裂解物应预热以抑制脱氧核糖核酸酶,加速蛋白质变性和促进脱氧核糖核酸溶解。
2、苯酚必须处于碱平衡。
苯酚有很强的腐蚀性,会对皮肤、黏膜、眼睛造成损伤,应加以保护。
氯仿易燃易爆易挥发,有神经毒性作用。
操作时应注意保护。
3、每个操作步骤都要温和,【异丙醇的作用】尽量减少人为降解DNA。
4、取上清液时,不应贪婪,以防非核酸成分干扰。
5、异丙醇、乙醇、NaAc、KAc等。
应预冷以减少DNA的降解,促进DNA和蛋白质的相分离和DNA的沉淀。【异丙醇的作用】6.DNA提取过程中使用的试剂和设备应经过高压干燥的无核酸酶处理。
7、所有试剂都是用高压双蒸水制备的。
2011年1月13日提问的女生因为低温可以促进DNA的沉淀莱克,【异丙醇的作用】在少量DNA的情况下(比如你的实验)可以改进提取效率。【异丙醇的作用】但是,如果DNA量大,往往是文是没问题的,比如咱们把它搞小当对老鼠脚趾进行基因分型时,它们都常温操作,沉淀还是超级的更多。
文章从网络整理,文章内容不代表本站观点,转账请注明【蓑衣网】